SweMagrose IDA-Co Granule de agaroză magnetică pentru purificarea proteinelor His-Tag

 

Numele produsului	Pisică. Nu.	Spec.
SweMagrose IDA-Co Granule de agaroză magnetică pentru purificarea proteinelor His-Tag	G3655-1ML	1 ml
	G3655-5ML	5 ml

 

 

Acest produs este preparat din margele magnetice de agaroză modificate de IDA și ioni de nichel chelatori. Poate purifica eficient și rapid proteinele marcate cu histidină din probele biologice fără filtrare centrifugă. Operația este simplă și potrivită pentru purificarea proteinelor marcaj histidină solubile exprimate în supernatant sau celule de bacterii, drojdii și celule. De asemenea, poate fi combinat cu echipamente de purificare a proteinelor de mare capacitate pentru screening-ul și separarea proteinelor.

Co2+ are 4 liganzi și mai puțină adsorbție nespecifică, Ni2+ are 6 liganzi și o capacitate puternică de legare la proteine, pentru mai multe proteine ​​țintă, puteți alege celelalte granule de agaroză magnetică SweMagrose IDA-Ni pentru His -Purificarea proteinelor marcate (G3654).

 

 

Navă cu gheață umedă; A se pastra la 4 grade, valabil 12 luni.

 

 

Numărul componentei	Componentă	G3655-1ML	G3655-5ML
G3655	SweMagrose IDA-Co Granule de agaroză magnetică pentru purificarea proteinelor His-Tag	1 ml	5 ml
Manual		1 buc

 

 

1. Configurația diferiților reactivi poate fi menționată după cum urmează. Utilizatorii pot alege cantitatea adecvată de margele magnetice și formula tampon în funcție de situația reactivilor.

Componentă	Volum
10×PBS (200 mM fosfat de sodiu, pH 7,4)	50 ml
10x tampon imidazol (200 mM fosfat de sodiu, 5 M imidazol, pH 7,4)	50 ml
Eliminator de cobalt (10 mM Tris-HCI, 500 mM NaCI, 100 mM EDTA, pH 7,4)	10 ml
Soluție de spălare alcalină (0,5 M NaOH, 2 M NaCl)	10 ml
href="javascript:;" Sulfat de cobaltos (100 mM CoSO4)	15 ml
Soluție de conservare (20% etanol)	50 ml

 

2. Configurare tampon

Performanța de legare a proteinei țintă cu perle de chelare cu ioni metalici va afecta în mod direct eficiența de purificare a proteinei țintă și diferite tampoane vor afecta, de asemenea, recuperarea și puritatea proteinei țintă într-o oarecare măsură. Prin urmare, înainte de purificarea pe scară largă a proteinelor, utilizatorii ar trebui să-și proiecteze propriile experimente pentru a verifica soluțiile tampon potrivite pentru proteina țintă, inclusiv tampon de legare, tampon de spălare și tampon de eluție. Sistemul tampon furnizat mai jos este potrivit pentru purificarea majorității proteinelor marcaj histidină pentru referința utilizatorilor.:

Tampon de legare: fosfat de sodiu 20 mM, NaCI 500 mM, imidazol 5~50 mM, pH 7,4

Tampon de spălare: fosfat de sodiu 20 mM, NaCI 500 mM, imidazol 50~100 mM, pH 7,4

Tampon de eluție: fosfat de sodiu 20 mM, NaCI 500 mM, imidazol 500 mM, pH 7,4

3. Tratamentul probei

a) E. coli, drojdie și alte proteine ​​exprimate intracelular: se adaugă 5~10 ml de tampon de legare per gram de celule, se adaugă inhibitor de protează (de exemplu, PMSF la o concentrație finală de 1 mM), se resuspend celulele și se lizează ultrasonic celule într-o baie de gheață, adică proba de proteină brută. Dacă proba este prea vâscoasă, cantitatea adecvată de nuclează poate fi adăugată la proba brută după cum este necesar și plasată pe gheață timp de 30 de minute pentru a degrada acizii nucleici. Alternativ, centrifugarea probei de proteină poate fi efectuată după cum este necesar.

b) Proteină exprimată extracelular: Proba de proteină brută a fost obţinută când supernatantul de expresie extracelular a fost diluat cu o cantitate egală de tampon de legare.

c) Proteine ​​exprimate intracelular în celulele animale: Luați cantitatea adecvată de celule animale, spălați o dată cu cantitatea adecvată de PBS (furnizată de la sine), aruncați supernatantul, resuspendați cu cantitatea adecvată de tampon de legare care conține 1% (v/v) Triton X -100 sau 1% (v/v) NP-40, adăugați inhibitor de protează (de exemplu, PMSF la o concentrație finală de 1 mM) și puneți-l pe gheață timp de 10 minute, adică o probă de proteină brută.

4. Legarea proteinei țintă de margele magnetice:

a) Suspendați 2 g greutate umedă a organismelor cu 10 mL de tampon de legare, iar după fragmentare și liză, o probă de proteină brută țintă este adăugată într-un tub de centrifugă care conține perle magnetice pre-tratate, iar tubul este plasat într-un mixer vortex și agitat timp de 15 s. Proba de proteină brută țintă este apoi adăugată într-un tub de centrifugă cu perle magnetice pre-tratate.

b) Așezați tubul de centrifugare pe un mixer rotativ timp de 20-30 min la temperatura camerei (dacă este necesar, se poate roti și amesteca timp de 1 oră la o temperatură scăzută de 2-8 grade pentru a preveni degradarea proteinei țintă) .

c) Așezați tubul de centrifugă pe separatorul magnetic pentru separare, transferați supernatantul într-un tub de centrifugă nou pentru testare ulterioară și scoateți tubul de centrifugă din separatorul magnetic pentru etapele de spălare ulterioare.

5. Spălarea mărgele magnetice:

a) Adăugați 10 ml de tampon de spălare în tubul de centrifugă care conține bilele magnetice, întoarceți ușor tubul de câteva ori pentru a resuspenda bilele, separați-le magnetic și transferați soluția de spălare într-un tub de centrifugă nou pentru prelevare. Repetați această procedură o dată.

b) Adăugați 10 ml de tampon de spălare în tubul de centrifugare care conține bile magnetice pentru a resuspenda bilele, transferați suspensia de sferele într-un tub de centrifugă nou (pentru a evita contaminarea proteinelor țintă cu proteine ​​adsorbite nespecific pe peretele tubului de centrifugă original). ), se separă magnetic și se pipetează supernatantul în tubul de colectare a tamponului de spălare.

6. Eluarea proteinei țintă

a) Utilizatorii pot ajusta concentrația proteinei țintă modificând volumul de eluție după cum este necesar. Adăugați 2-10 mL de tampon de eluție, întoarceți ușor tubul de câteva ori pentru a suspenda bilele, separați magnetic bilele și colectați eluatul într-un tub de centrifugă nou, care este proba de proteină țintă purificată.

a) Dacă este necesar, repetați pașii de mai sus o dată pentru a colecta proba într-un nou tub de centrifugă pentru a testa dacă proteina țintă este eluată complet.

b) Detectați proteina țintă prin SDS-PAGE sau Western blot. Dacă trebuie să măsurați concentrația de proteine, puteți utiliza tampon de eluție pentru a zero concentrația sau puteți utiliza dializă sau ultrafiltrare pentru a elimina imidazolul și apoi măsurați concentrația.

7. Post-procesare cu mărgele magnetice

a) Adăugați 5 ml de tampon de eluție în tubul de centrifugă care conține bilele magnetice, întoarceți tubul în sus și în jos de mai multe ori pentru a suspenda bilele, separați-le magnetic și îndepărtați supernatantul.

b) Repetați pașii de mai sus de două ori.

c) Adăugați 5 mL de ddH O în tubul de centrifugă care conține bilele magnetice, întoarceți tubul în sus și în jos de câteva ori pentru a suspenda bilele, separați-le magnetic și îndepărtați supernatantul.

d) Repetați pașii de mai sus de două ori.

e) Adăugați soluția de conservare la bilele magnetice pentru a obține un volum total de 5 ml, depozitați la grade 2-30 (pentru depozitare pe termen lung, plasați la 2-8 grade ) și poate fi folosit pentru următoarea purificare a aceleiași proteine.

8. Regenerarea mărgele magnetice

Când margelele magnetice sunt utilizate în mod continuu de 3 sau mai multe ori, capacitatea de a lega proteinele țintă poate fi redusă semnificativ și se recomandă efectuarea procesului de regenerare a mărgelelor magnetice. Luați 5 ml de suspensie de bile magnetice 10% (v/v) ca exemplu pentru a ilustra operația de regenerare a sferelor magnetice în detaliu.

a) Suspensia de bile magnetice a fost separată magnetic, îndepărtați supernatantul și scoateți tubul de centrifugare din separatorul magnetic, adăugați 5 ml de ddH2O în tubul de centrifugare și întoarceți tubul de centrifugă în sus și în jos de câteva ori pentru a resuspenda bilele magnetice. , separate magnetic și îndepărtați supernatantul.

b) Se adaugă 5 ml de agent de îndepărtare a cobaltului, se rotește tubul de centrifugare în sus și în jos de câteva ori pentru a resuspenda bilele magnetice, se rotește și se amestecă timp de 5 minute la temperatura camerei, se separă magnetic și se îndepărtează supernatantul. Repetați acest pas o dată.

c) Adăugați 5 mL de ddH2O în tubul de centrifugă care conține bilele magnetice, întoarceți tubul în sus și în jos de mai multe ori pentru a suspenda bilele, separați-le magnetic și îndepărtați supernatantul.

d) Tratament alcalin (etapa opțională): se adaugă 5 mL de tampon de spălare alcalin, se rotește tubul de centrifugare în sus și în jos de câteva ori pentru a resuspenda bilele, se rotește și se amestecă timp de 5 minute la temperatura camerei, se separă magnetic și se îndepărtează supernatantul. Adăugați 5 ml de ddH2O, întoarceți tubul de centrifugare în sus și în jos de câteva ori pentru a resuspenda bilele, separați magnetic și îndepărtați supernatantul. Repetați pasul de spălare ddH2O de 3-5 ori până când soluția de spălare este neutră.

e) Se adaugă 5 ml de clorură de nichel, se rotește tubul de centrifugare în sus și în jos de câteva ori pentru a resuspenda bilele, se rotește și se amestecă timp de 20 de minute la temperatura camerei, se separă magnetic și se îndepărtează supernatantul.

f) Adăugați 5 ml de ddH2O și întoarceți tubul de centrifugare în sus și în jos de câteva ori pentru a resuspenda bilele, separați magnetic și îndepărtați supernatantul. Repetați acest pas de 4 ori.

g) Adăugați soluția de conservare la bilele magnetice pentru a obține un volum total de 5 ml și depozitați la 2-30 grade (pentru depozitare pe termen lung, așezați la 2-8 grade).

 

 

1. Acest produs este depozitat în etanol 20% și trebuie înlocuit înainte de utilizare.

2. Nu înghețați sau uscați margelele, deoarece acest lucru poate afecta utilizarea finală.

3. Utilizați cu un cadru magnetic potrivit.

 

Numai pentru uz de cercetare. A nu se utiliza în proceduri diagnostice sau terapeutice!

 

 

Tag-uri populare: margele de agaroză magnetică swemagrose ida-co pentru purificarea proteinelor his-tag, China swemagrose ida-co margele de agaroză magnetică pentru purificarea proteinelor his-tag producători, furnizori, fabrică