Kit de transcriere T7 High Yield

 

Nume produs	Cat.Nr.	Spec.
Kit de transcriere T7 High Yield	G3021-50T	50 T

 

 

Kitul de transcripție T7 High Yield este un sistem complet pentru sinteza eficientă a ARN-ului pentru sonde de hibridizare in situ, teste de protecție a ribonucleazei, modificări post-transcripționale, inclusiv splicing și poliadenilare ARN și pentru traducerea in vitro. ARN polimeraza T7 este foarte specifică pentru propriul său promotor și va transcrie cantități mari de ARN din secvențele de ADN (de exemplu, plasmide, fragmente de reacție în lanț a polimerazei (PCR) sau ADN sintetic) în aval de promotorul său,

În sistemul de reacție, 1 ug de intrare șablon poate produce mai mult de 100 ug de ARN, care este potrivit pentru prepararea diferitelor lungimi de ARN.

 

 

 

Navă cu gheață umedă; Magazin la grade -20 , valabil 12 luni.

 

 

Numărul componentei	Componentă	G3021-50T
G3021-1	Amestecul de enzime de transcripție ARN T7	200 μL
G3021-2	Tampon de reacție de transcripție 5×T7	250 μL
G3021-3	25 mM NTP Mix	100 μL
G3021-4	ADNza I	50 μL
G3021-5	Apă fără nucleaze	1 ml
G3021-6	Șablon de control (0,5 ug/μL)	10 μL
Manual		Un exemplar

 

 

1. Pregătirea pentru șablon:

o. Plasmidă care conține promotorul T7: pentru a obține ARN de o lungime specifică, plasmida trebuie să fie complet linearizată și purificată ca matriță. Linealizarea plasmidei cu o enzimă de restricție ar trebui să producă o proeminență 5’ sau un capăt contonat (evitați capătul proeminent 3’). Cantitatea recomandată de șablon per reacție este de ~1 ug;

b. Produsul PCR sau ADN-ul sintetic: capătul 5' al primerului catenei necodante fuzionat cu secvența de la promotorul T7 (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3') realizează amplificarea PCR. Produsele PCR pot fi utilizate direct ca modele de transcripție fără purificare, dar randamentul de ARN va crește după purificare. Cantitatea recomandată de șablon per reacție este de ~0,5 ug.

2. Reacție de translație in vitro:

o. Adăugați următorul component într-un tub steril, fără nucleaze, pe gheață, în ordinea indicată

b. Se amestecă ușor și se centrifughează scurt.

c. Se incubează la 37 de grade timp de 2 ore. (Ajustați timpul de reacție în funcție de lungimea țintă și de randamentul dorit de ARN. De exemplu, ARN mai mic de 300 nt, se recomandă incubarea timp de 4 ore sau mai mult).

Componentă	Cantitate	Conc. finală
Șablon	0.5-1 ug	25-50 µg/mL
Tampon de reacție de transcripție 5×T7	4 μL	1×
25 mM NTP Mix	2 μL	2,5 mM
Amestecul de enzime de transcripție ARN T7	4 μL
Apă fără nucleaze	Până la 20 μL	--

3. ADNza I Tratament

După reacție, se adaugă 1 μL de DNază I, se amestecă scurt și se incubează la 37 de grade timp de 15 minute.

4. Cuantificarea produselor de transcriere

o. Analiza electroforezei pe gel

Se recomandă gel de agaroză de formaldehidă denaturant 1%.

b. Metoda de absorbție UV

Concentrația produselor ARN determinată de echipamentele de absorbție UV după purificare (nucleotidele libere vor afecta acuratețea cuantificării).

 

 

1. Vă rugăm să purtați mănuși și măști adecvate și să utilizați consumabile de unică folosință fără RNază pentru a preveni contaminarea cu RNază.

2. Pentru a prepara ARN-ul marcat, înlocuiți amestecul NTP din kit cu reactivul corespunzător.

3. Lungimea de transcriere a șablonului de control din kit a fost de 500 nt.

4. Pentru siguranța și sănătatea dumneavoastră, vă rugăm să purtați ochelari de protecție, mănuși sau îmbrăcăminte de protecție.

 

Numai pentru cercetare!

 

 

Tag-uri populare: kit de transcripție de mare randament t7, China t7 producători de kituri de transcriere de mare randament, furnizori, fabrică