Kit ADN pentru scaun

Acest kit utilizează proprietăți reversibile de adsorbție a acidului nucleic ale membranelor din fibră de sticlă, poate izola rapid și fiabil ADN genomic intact de înaltă calitate din probe de scaun proaspete sau congelate de 100-200 mg. Combinat cu un sistem unic de tampon de liză, poate elimina eficient acidul humic, polizaharidele, compușii fenolici și inhibitorii de enzime din probele de scaun. ADN-ul purificat este potrivit pentru tehnicile de biologie moleculară din aval, cum ar fi PCR, digestia enzimatică și hibridizarea.

Proteinaza K și RNaza A au fost transportate în pachete de gheață umede și depozitate la grade -20; Alți reactivi se transportă la temperatura camerei, se păstrează la temperatura camerei, valabil 12 luni.

1. Vă rugăm să pregătiți în avans o baie de apă la 70 de grade sau un bloc de încălzire.

2. Dacă reactivul precipită, dizolvați-l la 37 de grade și utilizați-l după revenirea la temperatura camerei.

3. Înainte de utilizare, adăugați 30 ml de alcool izopropilic în tampon SGB, adăugați 18 ml etanol anhidru în tampon SGD și adăugați 49 ml etanol anhidru în tampon PW.

1. Se cântărește 100-200 mg de probă de scaun într-un tub de centrifugă de 2 mL și se pune tubul pe gheață (dacă proba este lichidă, se pipetează 200 µL în tubul de centrifugă);

2. Adăugați 600 μL Buffer SLA, 15 μL Proteinază K și 0,25 g granule de măcinare (1 mm) în tubul centrifugal. Se recomandă utilizarea mașinii de șlefuit (KZ-III-F) pentru a măcina (60 Hz, 4 grade, rulare 30 s, pauză 10 s, măcinare de 5 ori) până la omogenizare sau folosiți un instrument vortex pentru a agita intermitent timp de 1 minut;

3. Se incubează la 70 de grade timp de 15 min. Vortexați proba de 2-3 ori în timpul incubației (dacă ADN-ul este izolat din bacterii gram-pozitive, temperatura de incubare poate fi crescută la 95 de grade);

4. Se centrifugă la temperatura camerei la 12,000 rpm (~13.400×g) timp de 10 minute, se pipetează supernatantul într-un tub de centrifugă nou de 1,5 ml, având grijă să nu aspire precipitatul;

5. Adăugați 10 μL RNază A la supernatantul obținut în pasul anterior, amestecați complet proba prin vorexare, incubați la temperatura camerei timp de 5 minute, apoi adăugați de 0,3 ori volumul de supernatant al tamponului SLB în tubul de centrifugă. , amestecați bine proba prin vortexare și baie de gheață timp de 5 minute;

6. Se centrifugă la temperatura camerei la 12,000 rpm (~13.400×g) timp de 5 minute, se pipetează supernatantul într-un tub de centrifugă nou de 1,5 ml, având grijă să nu aspire precipitatul;

7. Adăugați un volum egal de tampon SGB în tubul de centrifugă (asigurați-vă că a fost adăugat alcool izopropilic înainte de utilizare) și utilizați pipeta pentru a sufla și amestecați bine (pot apărea precipitații);

8. Transferați tot amestecul de la etapa anterioară în coloana de centrifugare ADN (cantitatea de fiecare adăugare nu trebuie să depășească 600 µL, dacă se pot adăuga mai mult de 600 µL în loturi), centrifugați la temperatura camerei la 12,{{4} } rpm (~13.400×g) timp de 1 min. Aruncați filtratul și puneți coloana de centrifugare ADN în tubul de colectare;

9. Adăugați 500 μL de tampon SGD (asigurați-vă că a fost adăugat etanol anhidru înainte de utilizare) în coloana de centrifugare ADN, centrifugați la temperatura camerei la 12,000 rpm (~13.400 ×g) timp de 1 min. Aruncați filtratul și puneți coloana de centrifugare ADN în tubul de colectare;

10. Adăugați 600 μL de tampon PW în coloana de centrifugare ADN (asigurați-vă că a fost adăugat etanol anhidric înainte de utilizare, adăugați tampon PW de-a lungul peretelui tubului pentru a ajuta la îndepărtarea sării reziduale de pe perete) și centrifugați la temperatura camerei la 12°C. ,000 rpm (~13.400×g) timp de 1 min. Aruncați filtratul și puneți coloana de centrifugare ADN în tubul de colectare;

11. Repetați pasul 10;

12. Repoziționați coloana de centrifugare ADN în tubul de colectare, centrifugați la temperatura camerei la 12,000 rpm (~13.400×g) timp de 2 minute, scoateți coloana de centrifugare ADN și puneți-o pe o nouă centrifugă de 1,5 ml. tub;

13. Deschideți capacul coloanei de centrifugare ADN și puneți-l la temperatura camerei timp de 3-5 min pentru ca etanolul rezidual să se volatilizeze complet;

14. Adăugați 50-100 μL tampon TE sau apă fără nucleaze în centrul membranei și puneți-o la temperatura camerei timp de 2 minute. Se centrifugă la temperatura camerei la 12,000 rpm timp de 2 minute și se colectează soluția de ADN. Dacă aveți nevoie de o concentrație mai mare de ADN, soluția obținută poate fi readăugată în coloana de centrifugare ADN, puneți-o la temperatura camerei timp de 2 minute și centrifugați la temperatura camerei la 12,000 rpm timp de 2 minute, eluând din nou ADN-ul .

1. Înainte de utilizare, asigurați-vă că citiți cu atenție acest manual al produsului.

2. Purtați o halat de laborator și mănuși de unică folosință în timpul funcționării.

3. Dacă proba de scaun este uscată, vă rugăm să măriți cantitatea de tampon SLA la 1 ml sau să reduceți greutatea probei, cu susul în jos de câteva ori și să stați la temperatura camerei timp de 3-5 minute după adăugarea tamponului SLA, în caz contrar randamentul ADN-ului va fi afectat.

4. Dacă aveți nevoie de incubare la 95 de grade, vă rugăm să deschideți capacul tubului de centrifugare o dată când temperatura atinge 95 de grade, descărcați gazul în tubul de centrifugă și apoi închideți bine capacul tubului de centrifugă pentru a preveni extinderea gazului din tubul de centrifugă și ruperea capacului, rezultând stropirea probelor de scaun.

5. Unii reactivi sunt volatili sau oxidați, trebuie evitată expunerea îndelungată la aer, reactivul trebuie închis la timp după utilizare.

Numai pentru cercetare!

Tag-uri populare: trusa de ADN pentru scaune, producătorii de truse de ADN pentru scaune din China, furnizori, fabrică