Kit de detectare fluorescent pentru calciu fluo-4 AM

Fluo-4 este o versiune îmbunătățită a Fluo-3 folosită în mod obișnuit în experimentele de detectare biologică a ionilor de calciu, diferența principală este că cei doi atomi de clor de pe molecula Fluo-3AM sunt înlocuiți cu fluor pe Fluo-4AM și modificarea mică a structurii poate face ca Fluo-4AM să se încarce mai rapid și semnalul de detectare să fie mai puternic la aceeași concentrație. Deoarece grupul AM al sondei Fluo-4AM nu numai că acoperă partea moleculară a calciului fluo-4 chelat, dar îi sporește și hidrofobicitatea, poate pătrunde cu ușurință în membrana celulei vii și poate intra în celulă. Când Fluo-4AM intră în celulă, acesta va fi tăiat în Fluo-4 de către lactază, rămânând astfel în celulă. Fluo-4 în sine are puțină fluorescență, dar atunci când este combinat cu ioni de calciu intracelular, poate produce fluorescență puternică. Intensitatea fluorescenței este proporțională cu conținutul de calciu intracelular.

Acest kit se bazează în principal pe principiile de detectare de mai sus, Fluo-4AM ca corp principal și oferă un tampon special de potrivire, ușor de utilizat, detectie mai sensibilă. Conținutul de ioni de calciu din celulele vii sau schimbarea dinamică a ionilor de calciu din celule pot fi măsurate prin microscop cu fluorescență, analizor de flux, etichetator de enzime etc.

Navă cu gheață uscată; A se păstra la -20 grade ferit de lumină, valabil 12 luni.

Notă: Timpii de reacție ale trusei de mai sus corespund sistemului 96-de test pe placă de godeuri.

1. Pregătirea pre-experiment: Celulele sunt inoculate în 96-plăci de godeuri și pre-tratate în consecință, conform scopului experimental;

2. Configurarea soluției de lucru Fluo-4 AM: pregătiți soluția de lucru Fluo-4 AM în funcție de necesitate, sistemul de configurare poate fi referit la următorul tabel, rețineți că diferitele caracteristici ale celulei sunt diferite, în funcție de situația reală a experimentului poate fi adăugată sau redusă concentrația sondei utilizate, raportul de diluție inițial recomandat de 1:500;

3. Markere de colorare (cu celule aderente ca exemplu; celula suspensie necesită schimbarea lichidului de fiecare dată, așa că vă rugăm să efectuați singur centrifugarea):

3.1. Îndepărtați mediul de cultură celulară original și spălați celulele de 2-3 ori cu PBS sau alte soluții tampon;

3.2. Îndepărtați tamponul de spălare, adăugați 100μL de soluție de lucru Fluo-4 AM în fiecare godeu și incubați într-un incubator cu celule la 37 de grade timp de 30 de minute ferit de lumină;

3.3. Îndepărtați soluția de lucru Fluo-4 AM la sfârșitul incubării și spălați celulele de 2-3 ori folosind PBS sau alte soluții tampon;

3.4. Înlocuiți cu tampon de detectare a ionilor de calciu și continuați incubarea timp de 15-30min pentru a asigura hidroliza adecvată a Fluo-4AM în celule (opțional);

4. Detectarea fluorescenței: Folosiți un microscop cu fluorescență, un marker de enzime și alte instrumente pentru a efectua detectarea acestuia. Fluo-4 AM este verde fluorescent cu EX/EM ≈ 494/528 nm.

1. Datorită proprietăților intercelulare diferite și diferitelor metode de pretratare, raportul dintre utilizarea sondei și intervalul de timp de incubare descris în pași sunt doar pentru referință și pot fi ajustate în funcție de circumstanțe specifice.

2. Coloranții fluorescenți au probleme de stingere, vă rugăm să acordați atenție pentru a evita operația ușoară pentru a încetini stingerea fluorescenței.

3. Fluo-4AM este foarte sensibil la umiditate, așa că vă rugăm să-l împachetați corespunzător, conform aranjamentului experimental, atunci când îl utilizați pentru prima dată. Soluția de lucru pentru test Fluo-4 AM trebuie pregătită gata de utilizare.

4. Unele precipitații după dezghețare sunt un fenomen normal și se agită complet înainte de utilizare pentru a se asigura că este complet dizolvată.

5. Pe baza principiului de funcționare al acestei sonde, nu este posibilă tratarea celulelor, cum ar fi fixarea sau perforarea.

6. Pentru sănătatea și siguranța dumneavoastră, vă rugăm să purtați halat de laborator și mănuși în timpul funcționării.

Numai pentru cercetare!

Tag-uri populare: kit de detecție fluo-4 am calciu fluorescent lon, China fluo-4 am kit de detectare lon calciu fluorescent producători, furnizori, fabrică