Mediu de separare a limfocitelor (uman)

Acest produs este o soluție de separare cu gradient de densitate potrivită pentru separarea limfocitelor din sângele periferic uman și a majorității celulelor mononucleare de mamifere. Principiul său se bazează în principal pe diferența de densitate dintre diferitele celule din sângele periferic (densitatea globulelor roșii și a granulocitelor este de aproximativ 1,090 g/ml; trombocitele este de 1,030-1,035 g). /ml limfocitele și monocitele sunt 1.075-1.090 g/ml), limfocitele sunt izolate din sângele periferic; centrifugare cu gradient de densitate. Acest produs este o soluție de separare sterilă, cu un nivel scăzut de endotoxine, gata de utilizare, cu o densitate de 1,077 ± 0,001 g/mL (20 de grade). Acest produs este optimizat pe baza tradiționalului diatrizoat de meglumină Ficoll pentru a menține stabilitatea soluției de separare pentru o perioadă mai lungă de timp după adăugarea probei de sânge, făcându-l ușor de utilizat și oferind o puritate și o stare ridicată a limfocitelor izolate.

Navă cu gheață umedă; depozitați la 2-8 grade, protejați de lumină; valabil 12 luni.

Pentru separarea a 1 ml de limfocite din sângele periferic uman, raportul de volum dintre sânge și mediu de separare a limfocitelor este de 1:1-1:2, cu ajustări adecvate în acest interval; la selectarea tubului de centrifugare trebuie avut grijă ca volumul total de sânge și mediu de separare a limfocitelor să nu depășească două treimi din volumul tubului.

1. Luați 1 ml de sânge integral anticoagulant proaspăt (se pot utiliza heparină, EDTA, citrat de sodiu și alte anticoagulante), diluați cu un volum egal de PBS (recomandat G4202) sau tampon Hanks (recomandat g4203) nu conține calciu și magneziu pentru a obține 2 ml de sânge integral diluat.

2. Se pipetează 3 ml de soluție de separare a limfocitelor din sângele periferic uman într-un tub de centrifugă steril de 15 ml (se recomandă EP-1500-J).

3. Înclinați tubul de centrifugare la 45 de grade și adăugați încet 2 ml de sânge diluat de-a lungul peretelui tubului în tubul de centrifugă, astfel încât sângele să fie plat pe stratul superior al mediului de separare a limfocitelor din sângele periferic uman.

4. Se recomandă utilizarea unei centrifugă cu cap orizontal, plasați tubul în adaptorul pentru cap orizontal, reduceți viteza centrifugei (3-5 viteze sunt adecvate) și centrifugați la 800 xg timp de 25 min la temperatura camerei.

5. După centrifugare, tubul este ținut ușor pe un suport de tuburi și se observă o stratificare clară: stratul superior este stratul de plasmă; stratul mijlociu superior este stratul limfocitar; stratul mediu inferior este stratul mediu de separare a limfocitelor; iar stratul cel mai de jos este stratul de eritrocite și granulocite (vezi figura atașată).

6. Îndepărtați stratul de plasmă superior și aspirați cu grijă stratul de tunica albuginea (stratul de limfocite) într-un tub de centrifugă steril nou.

7. Se spală cu 8 ml de PBS (recomandat G4202) sau alt tampon, se centrifugă la 100 xg timp de 10 minute, apoi se aruncă supernatantul.

8. Repetați pasul 7 (opțional).

9. Resuspendarea limfocitelor în mediul sau tamponul necesar conform scopului experimentului.

1. Produsul trebuie să fie complet echilibrat și amestecat cu capul în jos la temperatura camerei înainte de utilizare. Temperatura adecvată pentru separare este de 18-25 grade .

2. Pentru a menține activitatea limfocitelor, cel mai bine este să selectați sânge anticoagulant proaspăt în 2 ore de la recoltarea sângelui; Dacă este necesară o cultură și un test suplimentar al limfocitelor izolate, vă rugăm să acordați atenție operațiunii aseptice în timpul recoltării și separării sângelui.

3. Diluând sau spălând tamponul, nu utilizați tamponul care conține ioni de calciu și magneziu pentru a evita agregarea celulelor sanguine.

4. Absorbția excesivă a componentelor din afara stratului limfocitelor tunica albuginea va determina amestecarea unor granulocite sau trombocite de la joncțiune.

5. Diferențele dintre probele de sânge pot avea un impact asupra rezultatelor separării. Forța centrifugă și timpul pot fi ajustate corespunzător în funcție de situația actuală. Forța centrifugă de referință și intervalul de timp sunt 500-1000 xg și 20-30 min.

6. Este normal ca celulele roșii din sânge să se depună după amestecarea sângelui și a mediului de separare a limfocitelor pentru un anumit timp.

7. Pentru siguranța și sănătatea dumneavoastră, vă rugăm să purtați ochelari de protecție, mănuși sau îmbrăcăminte de protecție.

Atașament: Schemă schematică a fiecărui strat înainte și după separare

Acest produs este doar în scopuri de cercetare științifică, nu pentru diagnostic clinic!

Tag-uri populare: mediu de separare a limfocitelor (uman), China mediu de separare a limfocitelor (uman) producători, furnizori, fabrică